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一文與您分享肝細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的操作步驟

更新時(shí)間:2023-01-03  |  點(diǎn)擊率:608
  肝細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上,形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原,稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后,作用于底物使之呈色,根據(jù)顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。
 
  今天小編要與大家分享的是肝細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的操作步驟:
 
  1、標(biāo)本的采集及保存:
 
  (1)血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃經(jīng)過一夜夜后于1000xg離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 
 ?。?)血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 
  (3)細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000xg離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 
  (4)樣本處理:血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。
 
  2、試劑的準(zhǔn)備:
 
  按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑,胰島素elisa試劑盒中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正,從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
 
  3、加樣:
 
  分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
 
  4、溫育:
 
  用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 
  5、洗滌:
 
  小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
 
  6、顯色:
 
  每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
 
  7、測(cè)定:
 
  以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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